III.顯微切片製作過程 :

組織學實驗所使用之切片，為將組織或器官利用顯微技術(micro-technique)所製作而

成。在使用觀察切片前，如對其製片之過程能有所瞭解，則在觀察切片時將會有更深一

層的認識。以下為顯微鏡切片製作的一般流程 :

1.組織採樣(sample) : 組織的採樣應以新鮮而尚未壞死為標準，而動物組織在其死後立即開始壞死，故一般在動物組織的採樣均採自麻醉中或剛死之動物，兩人體組織在採樣上較為困難，以手術切除時附於異常組織上的正常組織為佳。

2.固定(fixation) : 固定的目的在殺死組織細胞，並防止細胞進一步的自體分解，維持細胞構造及形態上的不變。一般固定的方式可區分為浸透法(imersion)及灌流法(perfusion)兩種，以灌沆法固定效果較好。

3.包埋(embeding) : 一般組織柔軟，不易製作切片。故將固定組織經沖洗，脫水處理

後，即移入烘箱內滲臘，其目的在使臘滲入組織內以支持組織，便在切片的過程

中組織不致塌陷。在滲臘完成後，將組織包埋於臘內，做成臘塊(block)。

4.切片(sectioning) : 將臘塊經修整後，以切片機(microtome)將組織切成厚度5∼10um 厚之切片，將切片經展乎後以黏著劑黏於玻片(silde)上。

5.染色(staining) : 自然組織內的各種構造，在顯微鏡下其對比很弱，故需以染色的

方法來加強對比。染色的原理，即利用不同的染劑對不同組織，細胞，胞器及細

胞質的親合力上的差異，以增加組織內不同溝造的對比，使構造顯現，以利觀察。

染劑的種類很多，一般窩以兩種對比色的染劑做對比染色(counter staining) :

如:H-Estain

i)Hematoxylin:將細胞核染成藍色 ;

ii)Eosin:將妞胞質染成粉紅色。

此外針對不同的實驗目地，尚有組織免疫化學染色(immunohistochemistry)，自體

輻射造影術(autoradiography)‥‥﹒等特殊染色方式。

6.蓋片(mountiog) : 將染好的玻片經脫水，Xylene(或Toluol)使切片透明後，以加拿大膠(Canadia balsam)將蓋玻片封蓋在載玻片上，經烘乾後貼上標籤兩完成。

7.除上述常規之顯微鏡切片製作方式外，另依組織特性及需要，以下列方式製作切

片 :

7a.抹片(smear) : 用以觀察血液，腦脊髓液及黏液上皮等。

7b.張開(spread) : 利用金屬圈將膜狀組織(如:腹膜，膈繫膜等)張開，經脫水，透明

等手續所製成的片子，用以觀察膜狀組織內細胞的立體結構。